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胚胎冷冻方法的程序化慢速冷冻细节

胚胎冷冻方法的程序化慢速冷冻,在冷冻前的平衡:细胞冷冻前的平衡直接关系到细胞的脱水情况,包括平衡时间和温度。平衡时间过短,脱水不充分,容易形成细胞内冰晶。通常平衡时间为:5~30分钟(取决于不同的试剂,温度为:4~5℃

胚胎冷冻方法的程序化慢速冷冻,在冷冻前的平衡:细胞冷冻前的平衡直接关系到细胞的脱水情况,包括平衡时间和温度。平衡时间过短,脱水不充分,容易形成细胞内冰晶。通常平衡时间为:5~30分钟(取决于不同的试剂,温度为:4~5℃

胚胎冷冻

③冰晶形成:温度下降到一定数值,液体将开始形成冰晶,这个温度数值称为冰点(freezing point)。冰晶由纯水构成,不含溶质。冰晶形成后释放出大量热量而引起温度的波动,影响胚胎的存活。在―5~一15℃,温度已降至冰点以下,而细胞外溶液仍未结冰的现象称超冷现象,此时细胞外渗透压不能随之升高,细胞不能脱水。为防止这种现象发生需要诱导:冰晶形成可以向液体中加入微量冰晶,但较少采用。较常用的是植冰(seeding),即自动或人工用预冷的金属棒在标本溶液冰点以下2~3℃时,瞬间地接触标本,可以激发溶液中许多小冰晶形成,随着冰晶的蔓延,热量得以缓慢释放,保证了冷冻时温度的线性下降,细胞也进入脱水阶段。常用的植冰温度为:―6~—8℃,主要采用人工植冰.

降温速率: 最常见的引起细胞损伤的因素,它决定了细胞受损的程度以及方式,细胞内冰晶形成主要是降温速率过快或复温效率过慢引起的,溶液效应主要是过慢降温产生的。

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